無(wú)菌產(chǎn)品的高風(fēng)險潔凈區一旦發(fā)生微生物監測超標或是長(cháng)霉菌，將對無(wú)菌產(chǎn)品的無(wú)菌保障帶來(lái)極大的風(fēng)險。為此，首先需要分析可能導致微生物監測超標的人、機、料、法、環(huán)等各環(huán)節是否引入污染風(fēng)險，其次如果能找到確定的污染來(lái)源及原因當然是最好的結果，但往往居于微生物污染的不可重現性和隨時(shí)間推移找到的證據鏈越來(lái)越渺茫，這時(shí)就得針對可能引入污染的各種途徑采取有效的切斷措施，并對可能的人員、區域、水、環(huán)境和物體表面加強清潔消毒，以避免造成后續無(wú)菌風(fēng)險沒(méi)有控制和消除。下面就根據風(fēng)險分析的魚(yú)骨圖工具對人、機、料、法、環(huán)存在風(fēng)險進(jìn)行頭腦風(fēng)暴，并對風(fēng)險要素一一分析，分享如下：
1、人員
2、機器
3、物料
4、方法
5、環(huán)境
1、人員“無(wú)菌操作
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一是分析人員無(wú)菌操作的規范性，可通過(guò)回放AB級核心區人員的提供操作視頻，如是否動(dòng)作幅度過(guò)大、過(guò)快，是否有經(jīng)常人員手部在瓶子上方跨躍操作，是否干擾動(dòng)作過(guò)多，如加膠塞或加藥粉動(dòng)作不規范等；
二是開(kāi)RABS門(mén)次數較多，是否有炸瓶處理，是否灌裝不順經(jīng)常開(kāi)門(mén)干預；
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三是人員手動(dòng)裝機是否動(dòng)作過(guò)于復雜、裝機時(shí)間過(guò)長(cháng)，物料如原輔料、瓶子、膠塞等傳送過(guò)程中人員處理不規范，是否清潔消毒到位；
四是人員在AB級核心區的設備清潔消毒、墻面地面天花板等清潔是否按規定的SOP程序規范執行，有沒(méi)有該清潔到的則遺漏了，有沒(méi)有本應清潔三遍的結果只草草清潔了一遍等。
2、更衣
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回顧人員是否參與無(wú)菌操作更衣的更衣確認是合格，直接提供操作人員是否參與過(guò)培養基模擬灌裝驗證，是否進(jìn)入AB級核心區的部分人員近期有過(guò)表面微生物監測超趨勢或超限度。檢查無(wú)菌手套、胡須罩、眼罩、口罩等是有破裂，消毒乙醇是否有異常，無(wú)菌服是否滅菌正常，人員在更衣過(guò)程是否規范無(wú)異常。按規定進(jìn)入潔凈區的人員應對手部進(jìn)行清洗、干燥和消毒，人員是否均規范做到位。車(chē)間管理人員還應加強更衣規范性檢查與控制。
3、個(gè)人衛生
調查進(jìn)入AB級核心區人員個(gè)人衛生狀況，是否勤洗澡、勤洗頭發(fā)、勤換衣服、勤剪指甲，是否按規定不化妝、不配戴飾物，身體有傳染病、傷口或感冒應主動(dòng)報告并評估是否能允許進(jìn)入潔凈核心區內，人員是否有每年至少一次的健康體檢。如果員工住單位宿舍，也可順便在檢查房間衛生時(shí)檢查是否房間干凈整潔，衣物是否勤換洗，是否有霉味。如果個(gè)人衛生不注意，有可能帶到車(chē)間內導致微生物或霉菌污染，特別在南方的梅雨季節，要制訂防霉、防潮管理程序并嚴格執行。
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4、培訓
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應該經(jīng)常對員工進(jìn)行微生物、無(wú)菌操作規范的培訓，人員更衣確認和參加培養基模擬灌裝驗證要嚴格要求，新員工進(jìn)入AB級核心區必須是考核合格的，所有進(jìn)入潔凈核心區的提供、QA、QC、維修等人員均應嚴格遵守AB級核心區的規范管理制度。人是最大污染源，人員的無(wú)菌操作保障意識和實(shí)操要不斷練習和提高相應水平。培訓不能流于形式，不能遺漏或考核放水，無(wú)菌產(chǎn)品人命關(guān)天，來(lái)不得半點(diǎn)馬虎。
二、機器
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1、衛生死角
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AB級核心區內有些衛生死角可能導致微生物的污染，應該積極排查。比如，一是有些不能滅菌的部件或物品，如隔離器手套、稱(chēng)重天平、灌裝機的部分非金屬部件或墊圈墊片、吸膠塞星輪、檔板等，還有原料桶外表面和監測用培養碟；二是如灌裝機下面的技術(shù)夾層的設備部件或機臺下表面是否無(wú)菌，可取樣測無(wú)菌；三是回風(fēng)道、地板、人員鞋底、層流小車(chē)密封部件等；四是否有廠(chǎng)房沒(méi)有密封的小孔、小洞、裂縫，如燈具是否夾層漏水、漏氣等。
2、設備順應性
有時(shí)提供過(guò)程中干預動(dòng)作過(guò)大、頻次過(guò)多會(huì )增加微生物的污染風(fēng)險。如灌裝時(shí)經(jīng)常破瓶，倒瓶，卡塞掉塞，設備故障停機，灌裝量不穩等，為處理如停機等異?；蚬收?，這會(huì )增加人工去干預的機會(huì )，如夾子處理倒瓶炸瓶，手套會(huì )跨躍到敞口瓶子的上方，又如搞不定故障時(shí)還會(huì )增加開(kāi)RABS門(mén)的機會(huì )等。有些操作動(dòng)作也會(huì )增加風(fēng)險，如調壓塞，刮粉，多次調裝量等。這些都應在批記錄中進(jìn)行詳細的記錄，以便在出現產(chǎn)品污染時(shí)可以追溯加以調查分析。
3、環(huán)境監測儀器
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有時(shí)離線(xiàn)的粒子計數器也會(huì )帶來(lái)微生物的污染。比如是剛從其它車(chē)間轉過(guò)來(lái)的，傳遞時(shí)是否充會(huì )外表面消毒，是否清潔干凈，儀器是否有伴隨微生物污染的其它風(fēng)險。平時(shí)使用完后，是否按程序進(jìn)行清潔消毒，車(chē)間員工是否因為是QC的儀器就偷懶或干碎不去清潔，如不移出會(huì )放AB級核心區的哪個(gè)位置，是否有引進(jìn)微生物污染的其它風(fēng)險。
4、洗干衣機
洗衣雖然是清潔衣服的重要環(huán)節，但如洗干衣機日常管理不到位，也是有可能引入風(fēng)險。一是排水閥、過(guò)濾網(wǎng)是否定期拆下來(lái)清洗，是否是復雜的滾筒或洗干一體機，是否洗衣結束后會(huì )開(kāi)啟晾干，是否會(huì )有積水在洗衣機底部而滋生微生物，針對此環(huán)節可增加用清毒液定期清洗洗衣機等有效措施，如D級和D級以上潔凈區洗衣機至少每?jì)稍掠孟匆聶C機槽清潔劑清潔一次和使用消毒劑浸泡消毒洗衣機一次，梅雨季節縮短到每月一次。
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三、物料
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1、原輔料
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原料、輔料的無(wú)菌或微生物限度需要調查分析，是否物料本身帶入的。是否會(huì )在傳遞過(guò)程中帶入風(fēng)險，如無(wú)菌分裝藥粉的外桶是否清潔消毒到位，所使用消毒液是否除菌過(guò)濾。另外，檢查藥粉桶外、內蓋，是否有松動(dòng)、不密封情況，是否取樣后密封完全，會(huì )不會(huì )在取樣環(huán)節引入污染風(fēng)險。
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物料可分三個(gè)方面進(jìn)行管理：一是接收物料的管理。接料人員接收物料時(shí)，應檢查物料是否有長(cháng)霉菌，或外包裝破損應拒絕接收。二是物料使用過(guò)程的管理。提供車(chē)間使用原輔料前，應先確認環(huán)境的溫濕度符合潔凈室控制要求，方可打開(kāi)原輔料包裝。另外，原輔料的使用過(guò)程，要及時(shí)扎好原輔料包裝袋袋口，防止剩余原輔料吸潮和霉變。退回倉庫的原輔料應有雙層塑料袋包裝。三是存放物料的管理。首先，提供車(chē)間存放物料的管理。潔凈區應不能存放過(guò)多物料，防止造成衛生死角，每工作日應當對存放的物料進(jìn)行檢查，發(fā)現物料受潮或霉變，應啟動(dòng)偏差程序，并即時(shí)將物料轉移出潔凈區，使用殺孢子劑溶液對環(huán)境進(jìn)行強化消毒處理，以防污染菌擴散污染其他物料。其次，倉庫存放物料的管理。倉管人員應抽查各個(gè)庫區物料情況，規定定期抽查物料儲存狀況。梅雨時(shí)節應加強巡檢，若發(fā)現受潮或霉變物料，應啟動(dòng)偏差程序，并即時(shí)將物料轉移隔離，經(jīng)QA確認后按照不合格品進(jìn)行處理。
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2、消毒劑
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調查使用消毒劑的種類(lèi)，是否每月交替使用不會(huì )產(chǎn)生耐藥。消毒劑是否在有效期內，可能在過(guò)濾或傳遞環(huán)節過(guò)程中被污染。過(guò)濾的濾芯完整性是否檢查，過(guò)濾裝配過(guò)程、過(guò)濾過(guò)程是否規范。消毒劑的濃度、效力、殺菌范圍是否經(jīng)過(guò)驗證。消毒劑本身是否存在各種類(lèi)微生物，是否微生物負荷就很高，微生物、內毒素等安全性指標有在質(zhì)量標準中做內控規定到位。霉雨季節，需要用殺孢子劑溶液加強消毒，避免霉菌滋生。
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3、清潔工具
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一般AB級核心區內的清潔工具較為簡(jiǎn)單，如絲光手巾、不銹鋼盤(pán)、T字不銹鋼架、酒精噴壺等，檢查清潔工具是否清洗干凈，是否滅菌，拆開(kāi)是否完整，傳遞是否規范，噴壺內酒精有無(wú)被污染，清潔過(guò)程是否嚴格按SOP操作，絲光手巾沾洗消毒液是否到位，員工在清潔機臺、設備、墻、地面、天花板等區域是否規范等。
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4、培養碟
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培養碟有沉降菌、浮游菌、表面微生物碟，需要檢查使用的培養碟是否在效期內，從QC如何傳遞到車(chē)間的，是否有放置過(guò)夜情況，傳遞過(guò)程中是否檢查外包裝的完整性，無(wú)漏氣無(wú)破裂，放置在緩沖間或傳遞窗中的溫度是否有保證，使用前是否檢查有無(wú)冷凝水，從外圍一級一級傳入AB級核心區內，是否按程序脫包，是否按程序進(jìn)行外表面清潔消毒到位，在潔凈區內拆包使用時(shí)是否規范，開(kāi)蓋監測是否按規范操作，收碟時(shí)也按要求進(jìn)行。最后分析調查沉降菌、浮游菌、表面微生物監測結果，是否環(huán)境、表面等符合相應級別的標準，是否有超標、超警戒限、行動(dòng)限、超趨勢的情況，分析對微生物的污染的要關(guān)性。
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5、過(guò)濾器
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非終端滅菌的產(chǎn)品，如凍干或水針，往往會(huì )有兩道0.2цm的過(guò)濾器，微生物污染有沒(méi)有可能兩道過(guò)濾器漏了，可經(jīng)過(guò)回顧過(guò)濾器是否完整性檢漏通過(guò)了，有沒(méi)有可能過(guò)濾器的濾芯裝反了，有沒(méi)有可能過(guò)濾器的離線(xiàn)或在線(xiàn)的高壓滅菌出問(wèn)題了。還有是否可能洗瓶子高溫燧道滅菌的空氣過(guò)濾器不完整，或是沖氮產(chǎn)品的氮氣過(guò)濾器出問(wèn)題了，有沒(méi)有可能凍干機的壓縮空氣或沖氮過(guò)濾器有不同程度的泄露?？傊?，無(wú)菌提供中直接接觸產(chǎn)品的過(guò)濾器要一一調查分析，不漏過(guò)一個(gè)隱患。
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6、無(wú)菌手套
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無(wú)菌手套也是主要影響因素之一，一是人員更衣使用的無(wú)菌手套，另一個(gè)是RABS的手套。首先，更衣無(wú)菌手套要對供應商進(jìn)行審計，追溯無(wú)菌手套是怎么提供出來(lái)的，國產(chǎn)的無(wú)菌手套往往并不是太好用，容易破裂。較好的一些無(wú)菌手套來(lái)自馬來(lái)西亞等東南亞國家，但來(lái)的手套怎么保證無(wú)菌性，大多數廠(chǎng)家是拉去鈷60照射，但其照射劑量是否經(jīng)過(guò)驗證，要追溯到前端的批照射記錄。無(wú)菌手套入廠(chǎng)后，要按要求取樣做無(wú)菌檢測，也算是多一道保障。另外，無(wú)菌手套是否會(huì )破裂，使用前要檢查包裝的完整性，但有些針眼的微漏是很難發(fā)現的，所以定期的檢漏也是必要的。有些手套會(huì )出現不同數量的白點(diǎn)或黑點(diǎn)，會(huì )不會(huì )導致滲漏，會(huì )不會(huì )掉下來(lái)可見(jiàn)異物顆粒污染產(chǎn)品，這也是要關(guān)注的。進(jìn)AB級核心區的無(wú)菌手套應該是一次性的，重復使用不允許的。當然，也會(huì )用到一些能濕熱滅菌的手套，但其使用時(shí)進(jìn)行操作會(huì )有些不太方便，如出現微生物污染，也得調查其滅菌過(guò)程是否異常。
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其次，RABS的手套也是要檢查其無(wú)菌性和完整性的，無(wú)菌可通過(guò)擦試進(jìn)行，RABS的手套往往伴隨車(chē)間整體消毒時(shí)進(jìn)行的手套消毒，有些材質(zhì)好的手套耐濕熱滅菌，有些則不耐，要區別處理。要制訂定期更換RABS的手套的周期，提供使用完需要切底的清潔消毒，為及時(shí)干燥消毒的手套，可用無(wú)菌壓縮空氣吹干或讓RABS手套均充分展開(kāi)自然晾干，不能有沒(méi)展開(kāi)的死角沒(méi)有干透，有水的死角是很容易滋生微生物的，所以也要做這方面的調查。
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7、工衣
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使用工衣是否符合GMP的不脫落纖維等材質(zhì)標準，是否確定工衣清洗、滅菌次數和更換周期，是否沒(méi)有破損、滲漏等，進(jìn)AB級核心區的工衣滅菌是否合格，工衣脈動(dòng)真空和干燥程度如何，人員工衣進(jìn)行表面微生物監測的結果，分析調查。梅雨季節，工作服的清洗需使用抗菌洗衣液，AB級是每班次一套不重復利用，C級區、D級區潔凈服是否至少每月滅菌一次，如果返潮工衣當天應重新清洗、干燥。
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8、注射用水
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無(wú)菌提供過(guò)程中使用到的注射用水，有配液用的物料，有清洗配液罐和凍干機的，還有配制消毒液用的。一是配液用的注射用水要對其使用點(diǎn)定時(shí)監測，有些注射用水要需要貯存在罐內進(jìn)行冷卻到工藝的溫度要求，如2-8℃或15℃左右，你想從80℃以上的高溫降低到這么低的溫度，這就需要驗證時(shí)冷卻時(shí)間和冷注射用水的貯存有效期，是否會(huì )貯存過(guò)程中超過(guò)過(guò)濾前的微生物負荷，這也是要考察的。配液用的注射用水量是否會(huì )超過(guò)過(guò)濾器的載量，導致無(wú)菌風(fēng)險，這也是要驗證的。二是清洗配液罐和凍干機的注射用水，進(jìn)行CIP的用水量是否合適，有沒(méi)有可能注射用水微生物負荷過(guò)高導致無(wú)菌風(fēng)險。三是配制消毒液用的注射用水，也要保證配制、過(guò)濾過(guò)程中的微生物負荷過(guò)高或是過(guò)濾后消毒液有無(wú)菌污染的風(fēng)險。這些環(huán)節都是要調查取樣的，排除注射用水不會(huì )污染到產(chǎn)品和環(huán)境。
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9、公用介質(zhì)
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無(wú)菌提供過(guò)程中使用到的公用介質(zhì)主要有壓縮空氣和氮氣，從氣體源頭開(kāi)始調查，如使用外購罐還是空壓機或制氮機，進(jìn)到AB級核心區的管道是否有滲漏，使用的除菌過(guò)濾器是否在效期內，濾芯完整性是否檢測，過(guò)濾后管道的無(wú)菌性怎么保證，過(guò)濾后氣體是否根據風(fēng)險定期監測無(wú)菌性，如分裝無(wú)菌粉針劑時(shí)產(chǎn)品需要沖氮使用的過(guò)濾器，還有無(wú)菌凍干或水針過(guò)濾藥液用的過(guò)濾器，需要每批做濾芯完整性；有些如配液罐或凍干機等輔助過(guò)濾器，則定期測定濾芯完整性就可以了。